SDS-PAGE分離膠緩沖液（4×）說明書
Separating Gel Solution (4×)
目錄號：K0026
保存條件：2-8℃保存。
組分說明
Cat No. K0026A
Volume 500 ml
本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品為配制 SDS-PAGE分離膠緩沖液，可用于配制各種濃度的變性及非變性
PAGE凝膠，方便、快捷。產(chǎn)品中已加入10%SDS,使用時不用另外加入。
操作步驟
根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，J膠濃度請參考附表1。
I 灌制分離膠（各試劑使用量請參考附表2）
1．參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。
注：加入上層篩板有助于加樣時保持填料與樣品均勻接觸，是否加入上層篩板可根據(jù)實際情況選擇。
2．將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯或試管中混合。
3．加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
4．在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對于 mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端
1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，
使凝膠表面保持平整。
5．靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面后，表面凝膠已聚合。
II灌制濃縮膠（各試劑使用量請參考附表3）
1．去除覆蓋在分離膠上的水層。
2．將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、濃縮膠緩沖液和雙蒸水在一個小燒杯或試管中混
合。
3．加入10%過硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
4．將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。
5．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
6．靜置10~20分鐘，等待濃縮膠聚合。
7．待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
8．進行常規(guī)電泳操作。
附表
附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與理想分離范圍
SDS-PAGE分離膠濃度 理想分離范圍
6%膠 50-150 kD
8%膠 30-90 kD
10%膠 20-80 kD
12%膠 12-60 kD
15%膠 10-40 kD
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